Аннотация

Адоптивная иммунотерапия с использованием NK-клеток стала многообещающим терапевтическим направлением. NK-клетки являются компонентом врожденной иммунной системы, действуют как ключевые регуляторы и обладают выраженной противоопухолевой цитолитической активностью. Для того чтобы стало возможным оценить терапевтический эффект адоптивной NKклеточной иммунотерапии на доклинических этапах существует потребность в надежных протоколах для получения NK-клеток in vitro. Существует большое количество публикаций о способах активации и генерации NK-клеток человека, в том числе с использованием фидерных клеток и различных цитокинов. В статье описан опыт совместного культивирования NK-клеток от онкологических больных или доноров с фидерными клетками и без них (контрольная группа). В качестве фидера использовали клеточную линию К562 после облучения двух видов: после генной модифицикации К562 (гмК562) мембраносвязанными mbIL15, mbIL21 и без нее. NK-клетки смешивали с фидером в соотношении 1:1, 1:2 и 1:5 на 0-й, 7-й и 14-й день соответственно. Ежедневная морфологическая оценка показала, что после 3 суток культивирования NK-клетки как доноров, так и онкологических больных начинали пролиферировать и увеличиваться в размерах, а жизнеспособность фидерных клеток начинала снижаться, и к окончанию сроков культивирования составляла менее 20%. В контрольной группе без фидера после 3-го дня культивирования NK-клетки доноров и онкологических больных уходили в апоптоз, уровень их жизнеспособности снижался до 70%.

Проведена сравнительная оценка двух разных способов получения NK-клеток человека. Показано, что при выделении NK-клеток после магнитной селекции доля CD3-CD56+CD16+ клеток составляла более 90%, а после удаления адгезивных клеток – не менее 60%. При культивировании NK-клеток онкологических больных после магнитной селекции совместно с гмК562 на 21-е сутки количество NK-клеток увеличивалось в 85 раз. При культивировании NK-клеток доноров совместно с обычными К562 на 21-е сутки количество NK-клеток увеличивалось только до 8 раз. Показано, что в супернатантах, собранных в процессе культивирования NK-клеток с фидерными клетками двух видов, многократно увеличивались концентрации TNFα и IFNγ относительно контрольной группы. Экспериментальным путем подобраны оптимальные условия генерации NK-клеток.

Перейти к источнику